Для чего выполняется бактериальный посев на патогенную микрофлору и как расшифровать данные. Посев на флору и чувствительность к антибиотикам - показания, подготовка, забор материала и расшифровка Посев на микрофлору с определением чувствительности

Известно, что микроорганизмы, невзирая на свой «малый рост», тоже имеют пищевые «пристрастия», температурный оптимум, в общем, среду, которая им идеально подходит, где они чувствуют себя комфортно и хорошо, а поэтому начинают интенсивно размножаться и расти.

Бактериологический посев или, как принято называть короче – бак посев, применяется для получения большого количества микробов одного вида (чистая культура) с целью изучения их физико-химических и биологических свойств, чтобы затем полученные данные использовать для диагностики инфекционных заболеваний.

К сожалению, даже популярные нынче , и другие методы, основным недостатком которых являются ложноположительные или ложноотрицательные результаты, не всегда могут идентифицировать возбудителя. Кроме того, они не способны подобрать антибактериальные препараты направленного действия. Подобную задачу решает бак посев, который часто не спешат назначать, ссылаясь на то, что, например, медленно культивируется, а стоимость анализа немалая. Однако ведь и здоровье того стоит!

Для питания и дыхания нужны условия

Микробиологи нынче знают, что каждому возбудителю нужна своя «родная» среда с учетом ее рН, окислительно-восстановительных потенциалов, вязкости, влажности и осмотических свойств. Среды могут быть мягкими и твердыми, простыми и сложными, универсальными и не очень, однако во всех случаях они должны обеспечивать питание, дыхание, размножение и рост бактериальной клетки.

пример роста микроорганизмов после бак-посева в питательную среду

Некоторые среды (тиогликолевая, Сабуро) подходят для широкого круга микроорганизмов и называются универсальными. Другие же предназначены только для определенных видов, например, пневмококк и золотистый стафилококк, продуцирующие гемолизины, растут на кровяном агаре, который служит для выделения особо «капризных» и, вместе с тем, опасных штаммов. Таким образом, разновидностей сред множество, где каждая из них выращивает свой круг микроорганизмов.

Цель культивирования микроорганизмов и значимость ее для диагностики

Кроме воды, воздуха, почвы, содержащие в тех или иных концентрациях различные микроорганизмы, в том числе и приносящие болезнь (патогенные), многие отрасли медицинской науки интересуют микробы, живущие на коже и слизистых человеческого организма, которые могут быть представлены:

• Постоянными обитателями, не несущими никакой опасности человеку, то есть, нормальной микрофлорой организма, без которой мы просто жить не можем. Например, исчезновение бактерий, живущих в кишечнике и участвующих в процессе пищеварения, приводит к дисбактериозу, лечить который – дело непростое. Так же происходит и с исчезновением вагинальной микрофлоры. Ее тут же заселяют условно-патогенные микроорганизмы, гарднереллы, например, которые вызывают ;
• Условно-патогенной флорой, которая приносит вред лишь в больших количествах при определенных условиях (иммунодефицит). Вышеназванная гарднерелла – представитель такого типа микроорганизмов;
• Наличием патогенных микробов , которые в здоровом теле не присутствуют. Они чужды человеческому организму, куда попадают случайно при контакте с другим (больным) человеком и вызывают развитие инфекционного процесса, порой, довольно тяжелого или даже смертельного. Например, встреча с возбудителями – еще куда ни шло, на первых порах лечится, а вот (упаси Бог!) выпустит на волю холеру, чуму, черную оспу и др.

К счастью, многие из них побеждены и в настоящее время находятся «за семью печатями» в специальных лабораториях, однако человечество в любой момент должно быть готово к нашествию невидимого врага, способного уничтожить целые народы. Бактериологический посев в подобных случаях играет, пожалуй, главную роль в идентификации микроорганизма, то есть, определении рода, вида, типа и т.д. (токсономическое положение), что очень важно для диагностики инфекционных процессов, в том числе и заболеваний, передающихся половым путем.

Таким образом, методы посева, как и питательные среды, бывают разными, тем не менее, цель у них одна: получить чистую культуру без посторонних примесей в виде микробов других классов , которые обитают повсеместно: в воде, в воздухе, на поверхностях, на человеке и внутри его.

Когда назначается бак посев и как разобраться в ответах?

Название микроорганизма и его количество

Бактериологический анализ пациенты сами себе не назначают, это делает врач, если у него есть подозрения, что проблемы больного, предъявляющего различные жалобы, связаны с проникновением в организм патогенного возбудителя или с усиленным размножением микроорганизмов, постоянно живущих с человеком, но проявляющих патогенные свойства только в определенных условиях. Сдав анализ и через некоторое время получив на руки ответ, человек теряется, а порой и пугается, увидев непонятные слова и обозначения, поэтому, чтобы этого не произошло, хочется дать краткое разъяснение по данному вопросу:

При исследовании биологического материала на присутствие патогенных микроорганизмов ответ может быть отрицательным или положительным («плохой бак посев»), поскольку организм человека является для них лишь временным пристанищем, а не естественной средой обитания.

Иной раз, в зависимости от того, какой материал подлежит посеву, можно увидеть количество микроорганизмов, выраженное в колониеобразующих единицах на мл (одна живая клетка даст рост целой колонии) – КОЕ/мл. Например, посев мочи для бактериологического исследования при норме дает до 10 3 КОЕ/мл всех выявленных бактериальных клеток, в сомнительных случаях (анализ повторить!) – 10 3 – 10 4 КОЕ/мл, при воспалительном процессе инфекционного происхождения – 10 5 и выше КОЕ/мл. О двух последних вариантах в разговорной речи, порой, выражаются просто: «Плохой бак посев».

Как «найти управу» на патогенный микроорганизм?

Одновременно с посевом материала в таких ситуациях производится посев микрофлоры на чувствительность к антибиотикам, который даст четкий ответ врачу – какие антибактериальные препараты и в каких дозах «испугают» «незваного гостя». Здесь тоже есть своя расшифровка, например:

• Вид микроорганизма, допустим, та же Е.coli в количестве 1х10^ 6 ;
• Название антибиотика с обозначением (S) указывает на чувствительность возбудителя к этому препарату;
• Вид антибиотиков, не действующих на микроорганизм, обозначается символом (R).

Бактериологический анализ представляет особую ценность в определении чувствительности к антибиотикам, поскольку основной проблемой в борьбе с хламидией, микоплазмой, уреаплазмой и др. остается подбор действенного лечения, не приносящего вред организму и не ударяющего по карману пациента.

Таблица: альтернативный пример результатов бак-посева с выявлением эффективных антибиотиков

Правильная подготовка к бактериологическому анализу – залог достоверного результата

Бактериологическому анализу может подвергаться любой биологический материал, взятый у человека (кожа, кровь, сперма, слизистые ротовой полости, дыхательных и мочеполовых путей, желудочно-кишечного тракта, органов зрения, слуха и обоняния и др.). Чаще всего бак посев назначают гинекологи и урологи, поэтому на нем следует несколько остановиться.

Правильная подготовка к бактериологическому посеву будет залогом правильного результата, потому что в противном случае, анализ придется сдавать заново и ждать назначенное время. Как сдать кровь на стерильность из вены – это задача медработников. От больного здесь, как правило, ничего не зависит, он просто предоставляет локтевой сгиб, а медсестра производит забор в стерильную пробирку с соблюдением всех правил асептики и антисептики.

Другое дело – моча или из половых путей. Здесь пациент должен обеспечить первый этап (забор), соблюдая предписанные правила. Следует заметить, что моча женщин и мужчин несколько отличается, хотя в мочевом пузыре у обоих полов она стерильна:

• У женщин при прохождении через мочеиспускательный канал может захватить небольшое количество непатогенных кокков, хотя в целом, часто остается стерильной;
• У мужчин все несколько по-другому. Передняя часть уретры может снабдить проходящую мочу находящимися там:
  1. дифтероидами;
  2. стафилококками;
  3. некоторыми непатогенными грамотрицательными бактериями, что и покажет впоследствии бактериологический анализ.

Однако, если они находятся в допустимой концентрации (до 10 3 КОЕ/мл), то пугаться нечего, это вариант нормы.

Чтобы избежать присутствия других микроорганизмов и максимально обеспечить стерильность взятого материала , перед сдачей анализа производится тщательный туалет половых органов (вход во влагалище у женщин закрывается ватным тампоном – защита от попадания отделяемого половых органов). Для анализа берется средняя порция мочи (начало мочеиспускания в унитаз, приблизительно 10 мл средней порции в стерильную баночку , окончание в унитаз). Пациентам необходимо знать: моча, взятая на посев, должна быть обработана не позднее, чем через два часа при хранении не выше 20°С, поэтому следует рассчитывать время на транспортировку.

Кроме этого материал на бак посев при необходимости берут из уретры и прямой кишки у мужчин, из уретры, прямой кишки, влагалища, шейки матки и цервикального канала – у женщин, но это происходит в медицинском учреждении, куда пациент должен прибыть. Подмывание, спринцевание и использование антисептических средств в таких случаях запрещено.

Другие вопросы, волнующие пациентов

Многие пациенты интересуются, сколько дней делается анализ. Однозначно на этот вопрос ответить нельзя, все зависит от того, какой материал подвергается исследованию и какой возбудитель нужно искать. Иногда ответ готов через 3 дня, иногда через неделю или даже дней 10 – 14 , поскольку некоторые образцы требуют пересева на другую среду.

Не обходят стороной люди, направляющиеся на бак посев и вопрос о цене анализа. Примерная стоимость в Москве составляет порядка 800 – 1500 рублей. Разумеется, она может быть выше и зависит от широты спектра бактериологического поиска. Бесплатно анализ, наверное, можно сдать при беременности в женской консультации, или в поликлинике по особым медицинским показаниям.

Для беременных бак посев является обязательным, сдается 2 раза (при постановке на учет и в 36 недель), при этом, мазок берется не только из половых путей, но и со слизистых носа и зева. Объектом поиска в данном случае, кроме урогенитальных инфекций, будет золотистый стафилококк (Staphylococcus aureus), который в послеродовом периоде может натворить много бед (гнойный мастит и др). Кроме этого, беременным в обязательном порядке делается посев мочи, соскоба влагалищного эпителия и мазки из шейки матки и цервикального канала.

Многие женщины, перед тем как отправиться на процедуру очень боятся таких страшных слов и начинают раздумывать: «А нужно ли это? Может, не пойти». Спешим заверить, что анализы абсолютно безболезненны. Мазок из шейки матки и цервикального канала берется стерильной цитощеткой, не причиняя женщине абсолютно никакой боли, зато впоследствии бак посев из ш/м и ц/к защитит и будущую мать, и плод от возможных осложнений. Объектом поиска при беременности являются возбудители хламидиоза, уреа- и микоплазмы, дрожжеподобный (обычно это Candida albicans), и другие условно-патогенные и патогенные микроорганизмы.

Видео: ролик-демонстрация по бак-посеву из цервикального канала

Частные случаи, особо интересные сдающим анализы

Попав в половые пути патогенные микроорганизмы, через самое короткое время осваиваются и начинают свою вредную деятельность. Например, всегда патогенные гонококки (Neisseria), являющиеся виновниками довольно неприятной болезни, называемой и относящейся к ЗППП, чувствуют себя «как дома» буквально на 3 день. Они начинают активно размножаться и смело двигаться по половым путям вверх, захватывая все новые территории. Всем известно, что гонорея нынче неплохо лечится и ее уже почти никто не боится. Но для начала ее нужно найти. Основным методом поиска этой инфекции считается бак посев, культивирование, идентификация с помощью окрашивания по Граму, микроскопия.

Найденные в мазке, взятом «на флору» из половых путей, попарно лежащие «кофейные зерна» (диплококки), не указывают на наличие венерического заболевания. Такая микрофлора влагалища часто появляется в постменопаузе и ни о чем плохом не говорит. Отобранный в нестерильных условиях на предметное стекло и окрашенный метиленовым синим или по Романовскому (цитология) мазок, не может дифференцировать микроорганизм. Он может только предположить и направить пациентку на дополнительное исследование (получение изолированной культуры).

Следует заметить, что, если соскоб со слизистых мочеполовых путей, взятый для посева на уреаплазму, является не таким уж редким явлением, то посева мочи сами врачи часто избегают, поскольку с ней работать сложнее.

Трудности в диагностике создает , приносящая большой вред не только при беременности . Кроме этого, хламидия вызывает множество заболеваний, свойственных не только женщинам, но и мужскому населению тоже, поэтому ее сеют, культивируют, изучают, определяют чувствительность к антибактериальной терапии и, таким образом, борются с ней.

При беременности вообще без бактериологического посева трудно обойтись, поскольку многие микроорганизмы, маскируясь в цитологическом мазке, могут быть пропущены. Между тем, влияние некоторых возбудителей ЗППП на плод бывает губительным. К тому же лечить беременную женщину значительно сложнее, а назначать антибиотики «на глаз» просто недопустимо.

Методы посева

Для выделения чистых культур возбудителей на первом этапе прибегают к их посеву на соответствующие среды, который проводится в специальных (стерильных!) условиях. В основном, перенос материала на среду осуществляется с помощью приспособлений, применяемых еще в 19 века великим Луи Пастером:

• Бактериальной петлей;
• Пастеровской пипеткой;
• Стеклянной палочкой.

Конечно, многие инструменты за 2 столетия претерпели изменения, на смену пришли пластиковые стерильные и одноразовые, однако и старые не остались в прошлом, продолжая и поныне служить микробиологической науке.

Первый этап получения колоний требует соблюдения определенных правил:

1. Посев осуществляется над спиртовкой в боксе, предварительно обработанном дезинфектантами и кварцеванием, или в ламинарном шкафу, обеспечивающем стерильность в рабочей зоне;
2. Одежда медработника, перчатки и среда также должны быть стерильными, поскольку обратное мешает выделению изолированных штаммов;
3. Работать в боксе нужно быстро, но аккуратно, нельзя разговаривать и отвлекаться, при этом – необходимо помнить о личной безопасности, ведь материал может быть заразным.

Выделение штаммов и изучение чистых культур

Выделение штаммов не всегда одинаково, поскольку некоторые биологические среды, находящиеся в человеческом организме требуют индивидуального подхода, например, гемокультуру (кровь) сначала в жидкой среде (соотношение 1: 10) немного «подращивают», поскольку кровь (неразведенная) может убить микроорганизмы, а затем, через сутки или больше, пересевают на чашки Петри.

Посев мочи, промывных желудочных вод и других жидких материалов тоже имеет свои особенности, где для получения чистой культуры, жидкость сначала следует центрифугировать (условия – асептические!), а уж затем сеять, причем не саму жидкость, а ее осадок.

Культивирование и выращивание колоний осуществляют на чашках Петри или помещают сначала в жидкую среду, разлитую в стерильные флакончики, а затем изолированные колонии еще раз высевают, но уже на скошенный агар и помещают материал на сутки в термостат. Убедившись в чистоте полученной культуры, штаммы переносят на предметное стекло, делают мазок и окрашивают по Граму (чаще всего), Цилю-Нильсену и др. и для дифференцировки изучают морфологию микроба под микроскопом:

• Размер и форму бактериальной клетки;
• Наличие капсул, жгутиков, спор;
• Тинкториальные свойства (отношение микроорганизма к окрашиванию)*.

*Читатель, вероятно, слышал о таком возбудителе, как бледная трепонема? Это – возбудитель сифилиса, а ее название (бледная) поэтому и появилось, что она плохо воспринимает краски и остается слегка розоватой при окрашивании по Романовскому. Микроорганизмы, невоспринимающие анилиновые красители называются грамотрицательными, а воспринимающие – грамположительные. Грамотрицательным бактериям придают розовый или красный цвет при окраске по Граму дополнительные красители (фуксин, сафранин).

Бак посев можно назвать древним анализом, однако его популярность от этого отнюдь не падает, хотя современная бактериология имеет возможности выделения не только штаммов, но и отдельной клетки из него, которая называется клоном . Однако для получения клона необходим специальный прибор – микроманипулятор, который в обычных лабораториях отсутствует, поскольку применяется, в основном, в научно-исследовательских целях (генетические исследования).

Для получения достоверного результата анализ должен проводиться не менее чем через 2 недели после последнего приема антибиотиков и (или) антибактериальных препаратов.

• Соскоб из уретры рекомендуется сдавать через 2 часа после последнего мочеиспускания, из зева и носоглотки – натощак (через 4-5 часов после последнего приема пищи, при этом необходимо исключить чистку зубов и полоскание рта), для других локусов специальной подготовки не требуется.
• Моча. Исследованию подлежит средняя порция свободно выпущенной мочи, в количестве 3-5 мл в стерильный пластиковый одноразовый контейнер (контейнер можно получить в регистратуре) после тщательного туалета наружных половых органов без применения антисептиков. Срок доставки в лабораторию при комнатной температуре – 1-2часа, при температуре 2-8°С – 5-6 часов.
• Сперма для бактериологического исследования собирается в стерильный пластиковый одноразовый контейнер с широким горлом путем мастурбации (контейнер можно получить в регистратуре). Срок доставки материала в лабораторию при комнатной температуре в течение 1-2 часов.
• Мокроту рекомендуется собирать с утра, натощак после санации ротовой полости, в стерильную пластиковую посуду. Срок доставки материала в лабораторию при комнатной температуре в течение 1-2 часов, при температуре 2-8°С – 5-6 часов.
• Забор секрета предстательной железы осуществляет врач-уролог, после предварительного массажа простаты (данная манипуляция выполняется только в Центральном офисе). Перед забором секрета предстательной железы рекомендуется половое воздержание в течение не менее 2-х дней.
• Бактериологическое исследование грудного молока . Забор грудного молока проводится только до кормления ребенка или через два часа после его кормления грудью. Обследуемая пациентка обмывает левую и правую грудную железу теплой водой с мылом и насухо вытирает чистым полотенцем. Поверхность сосков и кончики пальцев обрабатывает ваткой, умеренно смоченной 70 % этиловым спиртом. Первая порция грудного молока, приблизительно в количестве 0,5 мл, сбрасывается. Затем, не касаясь соска руками, женщина сцеживает 0,5 – 1 мл молока из каждой железы в отдельный стерильный контейнер (контейнеры можно получить в регистратуре). Сроки доставки в лабораторию при комнатной температуре – 1-2 часа, при температуре 2-8°С – 5-6 часов.
• Забор синовиальной жидкости для бактериологического исследования осуществляется врачом в стерильную пластиковую посуду (контейнер можно получить в регистратуре). В условиях лаборатории эта процедура не выполняется. Срок доставки материала в лабораторию при комнатной температуре в течение 1-2 часов, при температуре 2-8°С – 5-6 часов.
• Забор раневого отделяемого для бактериологического исследования осуществляется врачом, в одноразовый контейнер со средой Эймса (контейнер можно получить в регистратуре). Срок доставки материала в лабораторию при комнатной температуре в течение 6 часов, при температуре 2-8°С – до 2 суток.
• Желчь для бактериологического исследования собирается при зондировании, отдельно, по порциям А, В и С в три стерильные пробирки, либо во время операции с помощью шприца в одну пробирку, соблюдая правила асептики (в лаборатории эта процедура не выполняется). Срок доставки материала в лабораторию при комнатной температуре в течение 1-2 часов, при температуре 2-8°С – 5-6 часов.

Мазок на флору является базовым и обязательным исследованием при посещении гинеколога. Этот метод помогает выявить воспалительный процесс на ранних этапах, отдифференцировать тип возбудителя, определить степень чистоты влагалища и наличие дисбиоза.

Забор проводится гинекологом из влагалища, шейки матки и наружного отверстия уретры. Полученные образцы помещаются на стёклышко, высушиваются и транспортируются в лабораторию для дальнейшего микробиологического изучения.

Информативность основывается на том, что разные клетки и бактерии окрашиваются в различные цвета. Эта особенность позволяет провести качественный и количественный анализ состава флоры и выявить патологические отклонения.

При помощи мазка определяют:

• содержание в выделениях эритроцитов и лейкоцитов;
• качественный состав микрофлоры и степень чистоты влагалища;
• возбудителей заболеваний, передающихся половым путём (гонорея, трихомонада, уреаплазма);

Бак посев на флору и чувствительность к антибактериальным средствам осуществляют при подозрении на воспалительный процесс в органах малого таза и нарушениях чистоты влагалища 3-4 степени.

Посев является культуральным методом и отличается от мазка тем, что материал помещается в благоприятную для потенциальных возбудителей среду, с последующим проведением исследования на их реакцию к применяемым противомикробным средствам.

Значительным минусом исследования является его длительность. В зависимости от возбудителя, посев на микрофлору с определением чувствительности к антибиотикам может проводится от 3-5 дней до нескольких недель.

С этим связна высокая частота эмпирического назначения антибактериальных препаратов, основанного на выборе средств с максимально широким спектром действия, затрагивающего всех предполагаемых возбудителей.

Для быстрой диагностики специфических возбудителей (заболевания, передающиеся половым путём) используют полимеразную цепную реакцию (ПЦР) или иммуноферментный анализ (ИФА).

• половых контактов и использования вагинальных методов контрацепции;
• спринцеваний, введения влагалищных кремов и суппозиториев.

Мазок желательно проводить минимум через две недели после отмены антибактериальных препаратов в связи с высоким риском ложноотрицательных результатов на фоне противомикробной терапии.

Период менструаций и два дня после их окончания считаются противопоказаниями к данному исследованию.

Особенности взятия клинического материала

Микробиологический анализ проводят с целью подтверждения или исключения воспалительных поражений инфекционной природы, определения состава микрофлоры с выявлением транзиторных (условно-патогенных) представителей, их количественного соотношения со здоровыми бактериями.

В нормальных условиях слизистая оболочка матки и труб стерильна за счет содержания в секрете цервикального канала лизоцима, имеющего противомикробное действие.

Состав нормальной микробиоты половых органов у женщин относительно стабилен. Незначительные изменения и различия, не считающиеся патологией, могут обуславливаться:

• возрастными особенностями;
• беременностью;
• гормональными изменениями.

Влагалищные мазки

Образцы для микроскопии собирают со слизистой заднего свода или с воспалительно-изменённых участков. После того, как было введено зеркало, выделения набирают на стерильный тампон из ваты. Для дальнейшего изучения окрашенного мазка отделяемое переносят на стёклышко путём перекатывания тампона по стеклу. Далее мазок сушат и производят фиксацию этанолом.

При необходимости проведения культурального исследования (посев на антибиотики из влагалища с определением восприимчивости патогенных микроорганизмам к различным препаратам) тампон необходимо сразу поместить в стерильную ёмкость и отправить в лабораторию.

Уретра

Забор образцов проводится бак. петлёй, после очищения наружного отверстия уретры стерильной марлей. Петлю вводят в уретру, не глубже двух сантиметров. Далее, для микроскопии и ИФА, образец распределяют по предметному стёклышку. При выполнении культурального анализа и полимеразной цепной реакции, материал помещают в ёмкость, содержащую специальную среду и доставляют в лабораторию.

Шейка матки

Забор проводится после открытия шейки матки в зеркалах и аккуратной обработки её влагалищной части физ. раствором. Тампон необходимо ввести в цервикальный канал, стараясь не касаться влагалищных стенок.

Если необходимо выполнить бак посев из цервикального канала на чувствительность к антибиотикам, тампон помещается в специальную среду для дальнейшей транспортировки и отправляется в лабораторию.

При заборе материала для микроскопии, ИФА, ПЦР и вирусологического исследования используют специальную тампонощёточку с целью получения клеточного соскоба. Забор необходимо проводить крайне аккуратно, чтобы не травмировать слизистую и не допустить попадания крови на тампон.

Вопреки расхожему мнению, процедура не противопоказана беременным женщинам и не может стать причиной выкидыша или нанести вред будущему ребёнку.

Матка

Через цервикальный канал в матку вводят специальный зонд, с дальнейшей аспирацией патологического содержимого. Необходимо строжайшее соблюдение правил асептики. Процедура не проводится при наличии воспалительных заболеваний шейки и влагалища, из-за риска заноса инфекции в полость матки.

Также, противопоказана в период беременности.

Придатки

Проведения забора материала осуществляется во время пунктирования опухолевидных образований или оперативного вмешательства. Как правило, для посева используют гной и экссудат.

Наружные половые органы

Образец берётся из воспалительно-изменённых участков. В случае поражения бартолиновых желез (больших желез преддверья) выполняют пункцию, с последующим взятием гноя на посев.

Показатели здоровой микрофлоры

Состав флоры напрямую зависит от:

• возраста пациентки;
• гормонального фона;
• наличия инфекционно-воспалительных заболеваний;
• фоновых патологий;
• приёма лекарств, нарушающих здоровый баланс микроорганизмов и бактерий (антибактериальные препараты, длительное употребление противогрибковых и нестероидных противовоспалительных средств, цитостатиков, гормонов).

Влагалищный микробиоценоз у ребёнка начинает формироваться после рождения за счет полученных в родах от матери лактобактерий (анаэробных лактобацилл-палочек Дедерлейна). Такой состав сохраняется до нескольких недель, поддерживая кислую реакцию. Далее, рН становится нейтральным и остаётся таким до полового созревания. На этом этапе, в состав флоры включаются условно патогенные бактерии (коринебактерии, стрепто-, стафило- и энтерококки, анаэробы).

После наступления полового созревания и усиления влияния эстрогенов повышается количество гликогена (субстрата для размножения лактобактерий). В следствие дальнейшего преобладания лактобацилл и продуцирования ими кислот из расщеплённых углеводов, происходит понижение рН до 4.0-4.5.

Поддержание лактобациллами рН влагалищных выделений на этом уровне, обеспечивает здоровый баланс флоры, подавление активности условно патогенных палочек и поддерживает естественную резистентность.

Степени чистоты

Разделение на степени чистоты основано на качественных показателях микрофлоры и количественном соотношении здоровых и условно патогенных бактерий.

Преобладание дрожжевой флоры характерно для молочницы.

Такое состояние может свидетельствовать о нарушении влагалищного микробиоценоза после длительного курса антибиотиков, цитостатиков, НПВС или гормонов.

По характеру микроорганизмов в мазке может определятся флора:

• смешанная (характерно для периода полового созревания, начала и конца менструаций, климакса, синдрома гиперфункции яичников, некоторых венерических заболеваний). Для уточнения диагноза необходимо провести подсчёт лейкоцитов в поле зрения и сделать ИФА или ПЦР;
• палочковая (гарднелёз или дисбактериоз влагалища);
• лактобациллярная (полностью здоровые показатели);
• коккобациллярная (вен. заболевания, бактериальный вагиноз).

Бак посев на флору с определением чувствительности к антибиотикам: расшифровка, нормы.

Наиболее простым в проведении и распространённым в клинической практике, является метод диффузии стандартных бумажных дисков, смоченных антибактериальными препаратами, в чашку Петри, заполненную питательной средой. Диски выкладывают по поверхности агара, соблюдая расстояние два сантиметра от края чашки и друг от друга.

После того, как чаша постоит при комнатной температуре, её перемещают в термостат.

Время выдерживания в термостате для каждых представителей флоры разное. Стандартный срок инкубации составляет от трёх до пяти дней.

• отсутствие задержки роста, указывает на полную устойчивость микроба к применяемому средству;
• кольцо, вокруг бумажного диска, диаметром до 1.5 см, свидетельствует в пользу слабой реакции. Данный препарат, также не будет эффективен в лечении;
• зона от 1.5 до 2.5 см, говорит о стандартной чувствительности и умеренной клинической эффективности;
• сверхчувствительность к препарату, характеризуется зоной более 2.5 см.

Пример

Пациентке установлен диагноз: хламидийный . Для эмпирической терапии, в данном случае, рекомендованы Азитромицин ® или Доксициклин ® . Выбор остановлен на первом препарате. Начато лечение. Клинически состояние больной улучшилось.

В результатах посева:

Расшифровка посева на микрофлору и чувствительность к антибиотикам:

Данные результаты показывают, что лечение было подобрано правильно.

• возбудитель имеет высокую чувствительность в отношении Азитромицина ® , также для лечения можно было использовать Эритромицин ® и Джозамицин ® ;
• умеренная чувствительность к Докициклину ® допустимо использовать;
• устойчивость к Левофлоксацину ® , Офлоксацину ® , Моксифлоксацину ® , Амоксициллина/клавуланату ® ;
• абсолютная резистентность к Цефтриаксону ® .

Проведение Е-теста

Определение восприимчивости к противомикробным средствам проходит аналогично дискодиффузионному методу, однако, вместо смоченных антибактериальными средствами дисков, в агар помещается полоска Е-теста. На ней размечены различные уровни концентрации антибиотика, начиная от максимальной и заканчивая минимальной.

Показатель минимальной концентрации подавления определяют в месте перекреста полоски теста и зоны подавления роста.

Этот метод является простым, но достаточно дорогостоящим, в связи с этим, диффузия дисков применяется чаще.

Нередко в медицинской практике пациентам назначается посев на флору с определением чувствительности к антибиотикам. При этом пациенты сами испытывают трудности с тем, чтобы подготовиться к сдаче анализа, и не всем понятно, для какой цели он служит. Подробнее об этом виде лабораторного исследования мы расскажем далее в статье.

Что такое посев на микрофлору?

Посев на микрофлору, он же бак посев, он же посев на антибиотики – это лабораторное исследование, при помощи которого можно определить тип возбудителя инфекции, его концентрацию в организме, а также устойчивость к лекарственным веществам. Эти сведения позволяют врачам точно диагностировать заболевание и максимально эффективно спланировать стратегию лечения.

Бактериологический посев может проводиться при использовании различного вида субстрата. В зависимости от предполагаемого заболевания или органа поражения, в качестве материала для исследования может использоваться практически любая биологическая жидкость: кровь, эякулят, выделения различных слизистых, спинномозговая и суставная жидкости, содержимое патологических образований (гнойников, кист), моча, как и т.д.

Бакпосев заключается в высевании бактерий из образца (диагностического материала) в питательную среду с последующим наблюдением за количественными изменениями бактериальных колоний. Счисление результатов определяют в КОЕ – колониеобразующих единицах, т.е. количестве жизнеспособных бактериальных клеток, способных к образованию новых колоний.

Где используют метод посева на микрофлору?

В соответствии с различным материалом для исследования, в результатах могут быть обнаружены различные типы возбудителей. Например, посев кала может показать такие группы бактерий, как сальмонеллы, шигеллы, тифопаратифозные бактерии, анаэробные бактерии. Часто посев кала на дисбактериоз с определением чувствительности к антибиотикам проводится пациентам, которые испытывают кишечные расстройства после длительного приема пероральных антибиотиков. Расшифровка этого анализа позволяет разграничить инфекционные кишечные расстройства от дисбактериоза.

В венерологической, гинекологической, урологической практиках используют анализ урогенитальной слизи на бактериальный посев. В этом виде анализируемого материала можно обнаружить, помимо бактерий, грибки. Среди бактериальных групп наиболее вероятны к обнаружению гоококки, листерии, уреаплазмы, и при подозрении на конкретную половую инфекцию врач может назначить посев на микоплазму или иную бактериологическую культуру.

Часто в общетерапевтической и пульмонологической практиках производится посев мокроты на микрофлору и чувствительность к антибиотикам. Этот анализ позволяет установить истинную причину бронхитов, и разделять инфекционные формы от аллергических и иных. В качестве анализируемого материала используется отделяемая при отхаркивании мокрота.

Такие жидкости организма, как грудное молоко, кровь, моча, желчь, суставная жидкость по своей природе являются стерильными, поэтому для них проводится посев на обсемененность, т.е. на выявление любых форм бактерий, т.к. они в любом случае будут являться патологичными.

Отдельно следует упомянуть посев эякулята, или, иначе говоря, спермы на флору. Посев спермы используется в урологической практике и позволяет эффективно выявлять половые инфекции. Может использоваться как посев на обсемененность эякулята на флору, так и анализ на наличие конкретного возбудителя – например, посев на хламидии с определением бактериологической чувствительности к антибиотикам.

Как происходит процесс диагностики?

После забора диагностического материала на флору и чувствительность к антибиотикам, его «сеют» в различные питательные среды. Выбор среды определяется возможностями конкретной диагностической лаборатории, а также целями диагностики. К примеру, для определения наличия конкретного возбудителя используется наиболее подходящая для него среда, а для разграничения различных возбудителей – дифференциально-диагностические среды. Для идентификации различных бактериальных колоний используется твердая питательная среда.

После произведения посева флоры на чувствительность к антибиотикам, субстрат помещают в термостат, который функционирует с заданными значениями температуры, влажности и времени. После этого полученные колонии антибиотиков извлекают, окрашивают, производят контрольный подсчет и осмотр. При необходимости количественного подсчета бактерий, субстрат несколько раз подряд разбавляют, после чего дается оценка определяемой культуре (или культурам) бактерий в целом.

Нередко пациенты задаются вопросом, почему выполнение посева на флору с определением чувствительности к расширенному спектру антибиотиков занимает у лаборатории длительное время (до 10 дней, например, при определении крови на стерильность). Это связано со спецификой роста бактерий: сам процесс их созревания в термостате не может быть ускорен без риска гибели колонии. Кроме того, если требуется провести количественный анализ нескольких видов бактерий, это занимает много времени в связи с количественной обработкой результатов.

Как правильно собрать материал для анализа?

Требования к пациентам, сдающим материал для анализа, столь же высоки, как и к лаборантам в медицинском учреждении. Посев на выявление бактерий требует большой тщательности по отношению к исследуемому материалу, т.к. в случае несоблюдения стерильности произойдет обсеменение бактериями, которые не имеют клинического значения, и результат анализа будет испорчен. Поэтому, первое требование – это использование специализированной стерильной посуды.

Второе – это то, что диагностируемый материал, если он по каким-то причинам собирается вне лаборатории, необходимо доставить туда как можно скорее. Чем более свежей будет исследуемая среда, тем выше будет шанс получить клинически верный результат исследования. Такое правило предусматривает приоритетность забора материала непосредственно в условиях лаборатории, или в непосредственной близости от нее.

Третье – это то, что персонал, собирающий материал для анализа, должен обладать определенными навыками. Это касается двух предшествующих пунктов: сохранение стерильности собранного материала и скорость его отправки на исследовании. Кроме того, сам посев и подсчет КОЕ может производиться только высококвалифицированным персоналом.

Требования к сбору диагностического материала

Сбор мочи для анализа следует производить утром, после гигиенических процедур половых органов, в стерильную посуду. Сбору подлежит первая утренняя порция мочи, объем которой должен составить от 10 до 15 мл. Сдавать материал нужно не позже, чем через 2 часа после его получения.

Забор кала производят в утренние часы, без применения клизм и слабительных, стерильной лопаткой в стерильную посуду. Объем собранного материала должен составлять 15-30 г. Сдавать кал можно в течение 5 часов после сбора, при этом не допускается его охлаждение или замораживание, т.к. это может привести к гибели бактерий.

В случае назначения анализа на мазок из носа и зева не допускается промывание этих слизистых антибактериальными растворами, питье, прием пищи, нельзя чистить зубы до забора анализа. Диагностируемый материал сразу после забора в условиях лаборатории отправляется на исследование. Напротив, если пациенту показан анализ мокроты, то ему необходимо чистить зубы и регулярно ополаскивать рот антибактериальным раствором до сдачи материала.

При проверке крови на стерильность не допускается предварительный прием антибиотиков. Материал собирается в условиях лаборатории, с соблюдением правил стерильности. Грудное молоко же можно собрать в домашних условиях или в палате. Для этого сначала проводятся водные гигиенические процедуры, затем кожа вокруг соска обрабатывается дезинфицирующим раствором, и молоко сцеживается в стерильный контейнер. Доставить его в лабораторию необходимо за 2 часа.

Мазок половых органов для женщин проводится в середине менструального цикла (не раньше 14 дней после завершения менструаций). При этом до пробы женщинам нельзя мочиться 2 часа, мужчинам – 5-6 часов. Забор пробы производится врачом. Аналогично, сбор эякулята должен проводиться в стерильных условиях.

Результаты посева на флору

При выявлении какой-либо конкретной бактериальной культуры нормальной реакцией будет являться результат, который может быть обозначен словами «нет роста» или «результаты пробы отрицательны». Если же определялась микрофлора какой-либо субстанции в целом, то хорошим знаком является обозначение «норма». Чувствительность к антибиотикам обозначается перечислением тестируемых препаратов и словами «да» и «нет», обозначающими наличие или отсутствие эффективности к конкретному препарату.

При выражении значений бактерий в КОЕ, следует различать показатели патогенной и условно-патогенной флоры. Последняя может довольно широко варьировать в своих показателях, не нанося человеческому организму никакого вреда. При нормальных показателях рядом с количественным значением указывается слово «норма». В случае же с патогенной флорой, «норма» теряет свое значение, т.к. патогенные организмы в принципе не должны обнаруживаться в здоровом организме, и значение КОЕ тут становится не важно.

Так или иначе, доверить расшифровку полученных результатов лучше своему лечащему врачу, так как ему в точности известно, какую цель преследовала диагностика и как в дальнейшем распорядиться этими результатами. В целом следует отметить, что посев на флору является одним из самых точных, хоть и трудоемких, лабораторных исследований, которое позволяет диагностировать и прогнозировать болезнь, а также разрабатывать эффективную тактику ее лечения.

Бакпосев на микрофлору - лабораторное исследование биологического материала посредством его высевания на питательную среду. Цель исследования - обнаружение в исследуемом материале патогенных или условно-патогенных организмов, а также дальнейшее решение задач специфической терапии.

В случае выявления определенной микрофлоры назначается проведение второго, не менее важного анализа - антибиотикограммы или определения чувствительности выявленной флоры к антибиотикам и бактериофагам.

К основным плюсам бакпосева на микрофлору относят:

• Высокую специфичность методики.
• Возможность исследования абсолютно любой биологической жидкости человека, как у мужчины, так и женщины. Бактериологический анализ мочи, кала, бакпосев из влагалища - все это исследуется посредством посева среды.
• Терапевтическую цель - выявление чувствительности обнаруженных микроорганизмов к тому или иному лекарственному препарату дает возможность проводить терапевтические назначения с высокой точностью.

Что относительно недостатков - они несущественные, но они есть. К ним относятся: продолжительность получения результата, повышенные требования к сбору материала, требования к квалификации работников.

Условия роста микробов

Микрофлора, оказавшись в хороших для нее условиях, растет и размножается активно. Таков закон природы, и мы не вправе на него повлиять. Когда эти процессы имеют место в человеческом организме, отмечается развитие заболевания. Обусловливается это изменениями микрофлоры. Выявление возбудителя, его разновидности и концентрации, реагирование на медикаментозные препараты можно произвести при помощи бакпосева на микрофлору.

Иные методы диагностики далеко не всегда точно выявляют возбудителя, и даже выдают ложноположительный или ложноотрицательный результат. Каждая разновидность бактерий нуждается в определенных условиях для проживания. Подходящими должны быть влажность, кислотность и вязкость.

В лаборатории с целью определения вида патологического организма его высеивают на специальную среду. Есть такие среды, на которых может произрастать сразу несколько различных видов микроорганизмов. Их называют универсальными. К таковым относят тиогликолевую и среду Сабуро. Иные предназначены исключительно для одного штамма. Так, например, стрептококковая и стафилококковая флора сеется исключительно на солевой или кровяной агар.

Бакпосев на микрофлору: кому показан

Данная методика довольно распространена в медицине. Ее проведение назначается при подозрении на наличие пагубной флоры, спровоцировавшей развитие воспалительного или инфекционного процесса. Данная методика распространена в гинекологии, онкологии, урологии, хирургии. Основным показанием к проведению исследования является воспалительная патология или подозрение на септический процесс.

Бакпосев никогда не проводится самостоятельно. Проведение данной методики назначается исключительно врачом и только при подозрении на наличие патогенной флоры.

К основным разновидностям методики относят: бакпосев на стафилококковую флору, уреаплазму, микоплазму, хламидию, посев на бактерии из раны, урогенитальный бакпосев. Для анализов могут брать любую жидкость: слизь из носоглотки, слизи из ВДП, образец кала, влагалищные выделения, выделения из цервикального канала и уретры, мочу, кровь, содержимое ран, воспалительных очагов.

Цель и ценность бакпосева

Патогенные организмы, проникающие на слизистые и дерму, разделяют на несколько групп. Среди них выделяют нормальную, условно-патогенную и патогенную (болезнетворную) микрофлору.

1. Под нормальной микрофлорой подразумеваются микроорганизмы, которые считаются постоянными невредными жителями. Это норма. Наличие такой флоры способствует правильному функционированию человеческого организма. При наличии нормальной микрофлоры все системы и органы, в частности ЖКТ, работают слажено и правильно. Недостаток этих организмов чреват развитием бактериального вагиноза или дисбактериоза.
2. Что относительной условно-патогенной флоры, то она при условии крепкой иммунной системы безопасна для организма. Понижение защитных сил организма провоцирует активацию, рост и размножение бактерий, а также развитие заболеваний.
3. Болезнетворная микрофлора в здоровом организме не обитает. Заселяется она, как правило, при инфицировании.

Культуральный метод и антибиотикограмма имеют весомое значение в выявлении микроорганизмов, их штамма и разновидности. Эта методика важна для диагностирования инфекционных патологий и недугов ППП. Под антибиотикограммой подразумевается выявление чувствительности обнаруженной бактерии к определенному лекарственному средству, обладающему антибактериальными свойствами. Антибиотикограмма считается неотъемлемым компонентом бактериологического исследования, это набор лекарств, к которому паторганизм резистентный или чувствительный.

Чтобы было понятней, под восприимчивостью микроорганизма подразумевается его чувствительность к препарату, то есть то, как антибиотик подействует на рост организма. Под резистентностью подразумевается устойчивость флоры к лекарству. То есть антибактериальное средство в данном случае не подействует. При выявлении штамма пагубной микрофлоры, ее высеивают в лабораторных условиях на среду с антибактериальным препаратом. О тех средах, где рост организма незначительный или вовсе отрицательный, врачи делают записи в специальных формах.

Эти антибиотики являются самыми эффективными в лечении заболевания. Так как культуральная методика - довольно продолжительный процесс (не менее недели), в первую очередь назначаются лекарства, обладающие широким спектром действия. Большая часть патогенных организмов обладает устойчивостью к определенному лекарственному средству, а это означает, что недельное применение может оказаться малоэффективным.

Благодаря антибиотикограмме, расшифровка которой проводится специалистом, можно подобрать единственный эффективный препарат. В бланке указываются разновидность, штамм и концентрация возбудителя, а также названия антибиотиков с указанием чувствительности R, S, I и зоны. S означает, что бактерия устойчива к лекарству, I свидетельствует об умеренной активности микроба, а R свидетельствует о чувствительности бактерии к данному антибактериальному препарату.

Бак посев на флору: как проходит подготовка и как проводят бактериальный посев в лаборатории

Материалом для диагностирования может быть любая жидкость человеческого организма - кровь, моча, эякулят, кал, мокрота, выделения из влагалища. Зачастую бак посев на флору назначается специалистами области гинекологии и урологии. К примеру, мазок из влагалища или шейки матки (при подозрении на вагиноз).

Чтобы получить правильный результат, необходимо подготовиться. Основное правило - стерильность емкостей и инструментария. Несоблюдение этого правила чревато контаминацией, следовательно, исследование будет бессмысленным. Для забора биоматериала используется стерильная посуда. Она выдается пациентам на руки. Из воспалительных очагов материал забирают с помощью стерильного инструментария и только квалифицированные специалисты, зачастую это медсестра смотрового или инфекционного кабинета.

Кровь и урина собираются в сухие пробирки, а иные жидкости в тары с питательными средами. Следующее не менее важное правило - материал должен забираться до начала антибактериальной терапии. Привезти или принести материал в больницу необходимо как можно быстрее. Микрофлора может погибнуть из-за изменения кислотности или высыхания. Образец каловых масс доставляется в теплом виде.

При мазке из носа и зева (к примеру, при гайморите) с утра запрещено чистить зубы и ополаскивать нос и рот, а также употреблять пищу или жидкость. Для бак посева на флору мочи берется средняя порция материала - пятнадцать миллилитров. Перед сбором урины необходимо провести гигиенические процедуры. Привезти жидкость для исследования необходимо за два часа. Забор кала производят с утра при помощи лопаточки.

Материал (20 грамм) помещается в стерильную тару и доставляется в больницу в течение пяти часов. Хранить или замораживать кал для бак посева на флору нельзя. К тому же не стоит перед опорожнением принимать слабительные или ставить клизмы. Забор крови рекомендуют проводить перед началом антибактериальной терапии. У детей берут пять миллилитров, а у взрослых пятнадцать миллилитров.

Слизь с ВДП собирается сразу после пробуждения на голодный желудок в стерильную тару. Прежде чем собрать материал рекомендуется почистить зубы и ополоснуть рот вскипяченной остуженной водой. Привезти мокроту в медицинское учреждение необходимо на протяжении часа. Грудное молоко берут после обработки области сосков тампоном, пропитанным спиртом.

Нужно сцедить двадцать миллилитров молока, на анализ берутся следующие пять миллилитров. Рекомендуется доставить молоко в больницу в течение двух часов. Выделения из половых органов у слабой половины общества забирают по истечении двух недель после месячных, не ранее. К тому же забор выделений нельзя проводить при приеме антибиотиков. Мужчинам до сбора материала не советуют ходить в туалет в течение пяти часов.

Как делают бак посев на флору в лабораторных условиях

Исследуемая жидкость сначала высеивается на питательную среду. В зависимости от желаемого поиска бактерии, посев производят на разные среды. Так к примеру, для роста определенного организма (рост остальных угнетается) используется избирательная среда.

Например, свернувшуюся сыворотку лошади используют для идентификации бактерии, провоцирующей развитие дифтерии, а среду с солями желчных кислот для выявления микроорганизмов, которые провоцируют развитие кишечных патологий.

Следующий пример - дифференциально-диагностические среды. Их используют для расшифровки бактериальной культуры. Следующий этап - помещение питательной среды с организмами в термостат. Там они находятся какое-то время.

Далее производится контрольный осмотр колоний, при котором оценивают форму, цвет и плотность культуры. Далее возбудители подсчитываются. При исследовании используется такое понятие как колониеобразующая единица, подразумевающее одну микробную клетку. По КОЕ определяется концентрация бактерий.

Анализ на бак посев: посев при беременности, посев образца кала, расшифровка результатов

Результат анализа на бак посев заключается в качественной (само наличие флоры в материале) и количественной оценке микроорганизмов в исследуемой жидкости. Расшифровка результата осуществляется таким способом. Всего существует четыре степени обсемененности бактерий в исследуемом биологическом материале (сперме, моче, крови, мокроте).

Первая степень - наблюдается очень медленный рост флоры. Растет она исключительно в жидкой среде. Что относительно второй степени, то тут наблюдается рост микрофлоры отдельного вида (до десяти колоний) исключительно на плотной среде. Что касательно третей, то тут флора растет (10-100 колоний) на твердой питательной среде. Что касается последней, наблюдается рост более чем 100 колоний на твердой среде. Первая и вторая степени являются свидетельством «загрязненной микрофлоры». Третья и четвертая степени сигнализируют о воспалении, спровоцированном данной разновидностью флоры.

Бак посев кала

В ЖКТ постоянно живут бактерии, способствующие нормальному пищеварению, а также синтезу ферментов и витаминов. Соотношение микроорганизмов является постоянным, но может колебаться. Понижение защитных сил организма, проникновение пагубной микрофлоры, продолжительный прием антибактериальных препаратов - все это чревато нарушением баланса. Отмечается уменьшение концентрации полезных лакто- и бифидобактерий. Их место занимает болезнетворная флора, такая как протея или кишечная палочка. Кал для анализа на бак посев забирают в стерильную емкость и отравляют в лабораторию. Результат можно узнать спустя пять-семь дней.

При беременности

Анализ на бак посев во время беременности - обязательная методика диагностирования. Проводится она два раза: при постановке на учет и на 36ой неделе. Производится мазок из влагалища или шейки матки, а также из носоглотки и зева. Таким способом определяют наличие воспаления в половой системе, а также носительство такого микроорганизма, как золотистый стафилококк. Объект поиска при беременности - патогенная микрофлора: трихомонада, уреаплазма , микоплазма, хламидия.

При обнаружении болезнетворной флоры терапию проводят незамедлительно. Несвоевременное выявление микроорганизмов, а также отсутствие терапии чревато инфицированием плода. Тактика терапии, схема и курс подбирается исключительно квалифицированным специалистом. Бактериальный посев и антибиотикограмма - показательные методики диагностирования, позволяющие точно идентифицировать возбудителя и подобрать правильную терапию.